Page 81 - 中国全科医学2022-14

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【Abstract】 Background Based on the current prevalence of Coronavirus Disease 2019 （COVID-19），early
diagnosis，isolation，and treatment are important methods to prevent and control infectious diseases. The establishment of
convenient and efficient immunochromatographic detection techniques is essential for the prevention and control of COVID-19
epidemic. Objective To establish a method for the detection of SARS-CoV-2 anti-N protein IgG antibody by immun of
luorescence chromatography method based on quantum dots labeling technology in August，2020. In order to determine whether
the detected persons had been infected with COVID-19 or been injected with SARS-CoV-2 inactivated vaccine. Methods The
prepared rat anti-human secondary antibody and anti-N protein antibody were immobilized on a Nitrocellulose （NC） membrane
as detection line （T） and quality control line （C），respectively. Then the SARS-CoV-2 N protein labeled by quantum dots
was evenly sprayed on glass fiber，which was assembled，cut and packaged into test strips after drying. The test strips were used
to detect the clinical serum of 35 COVID-19 patients and 50 healthy individuals，the results of the initial screening of the ELISA
kit were used as a control to calculate the detection specificity and sensitivity of quantum dots fluorescence immunochromatography.
The sensitivity of the test strip was detected by using the N protein antibody standard. Results The specificity and sensitivity
of the strip were 100.00%，94.29%，and the susceptibility was 8.53-17.06 ng/ml antibody concentration. Conclusion The
detection of anti-N protein IgG antibody in serum by quantum dots labeling is simple，fast，with strong sensitivity and specificity.
【Key words】 COVID-19；SARS-CoV-2；Fluorescence immunochromatography；Quantum dots；IgG antibody；
Nucleocapsid（N） protein

目前，对于由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）引起 检测线（T 线）荧光值，使灵敏度更高，更客观可靠，
的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）没有特效治疗方法， 可用于检测人血清、血浆、指尖血样本中的抗 SARS-
早发现、早报告、早检测、早隔离是疫情防控的重要 CoV-2 N 蛋白 IgG 抗体。制备的免疫层析检测试纸条，
手段 ［1］ 。SARS-CoV-2 属于 β- 冠状病毒簇，是一种 可辅助临床判断被检者是否感染 SARS-CoV-2 以及体内
具有外膜的正链单股 RNA 病毒，其基因组可编码 RNA 是否产生抗体，对疾病流行筛查及评估均具有较大意义。
聚合酶、刺突 （S） 糖蛋白、膜 （M） 糖蛋白、包膜 1 材料与方法
（E） 糖蛋白和核衣壳（N）蛋白 ［2］ 。其中 N 蛋白不 1.1 材料来源 50 例健康人血清（阴性样本，本课题
仅将病毒 RNA 和蛋白质包装成病毒体，还能促进病毒 研究始于 2020 年 8 月，期间解放军疾病预防控制中心
RNA 的转录和复制，并损害宿主细胞的免疫反应，是 采集注射腺病毒疫苗的健康人血清）及 COVID-19 患者
一种高免疫原性且在感染过程中大量表达的蛋白，目前 阳性灭活血清（阳性样本，来源于解放军疾病预防控制
关于 SARS-CoV-2 N 蛋白的报道相对较少，迫切需要对 中心 2020 年 3 月随机采集于武汉火神山医院的阳性血
SARS-CoV-2 N 蛋白的更新认识 ［3-5］ 。同时，N 蛋白相 清样本）。
对保守，在病毒的结构蛋白中所占比例最大，感染早期 1.2 试剂与仪器 量子点微球（QDS）（上海迈瑞尔科
机体能产生抗 N 蛋白的高水平抗体 ［6］ 。另外一个重要 技有限公司、昆道公司、BRAVEOS 以及 ACMES）、鼠
的蛋白是 S 蛋白，其可以介导 SARS-CoV-2 进入宿主细 抗人 IgG 抗体（北京索莱宝公司）、硝酸纤维素膜（NC 膜）
胞。研究显示，中和抗体主要通过与 S1 亚基上的受体 （WATMAN）、玻璃微纤维（样品垫）（上海金标公司）、
结合域（receptor binding domain，RBD）片段结合进而 聚脂纤维（结合垫）（上海金标公司）、吸水垫（上海
竞争性地阻断 S 蛋白与血管紧张素转换酶 -2（ACE2） 金标公司）、N 蛋白 IgG 抗体检测 ELISA 试剂盒（北京
的结合，因此，SARS-CoV-2 的 S1 蛋白是抗病毒中和 科卫科技有限公司），SARS-CoV-2 抗 N 蛋白 IgG 抗体
抗体的重要靶点 ［7］ ，能够诱导机体产生中和抗体，是 标准品 85.3 μg/g，中国计量科学研究院，编号：GBW
研究疫苗的常用抗原 ［8］ 。检测血清中 SARS-CoV-2 抗 （E）091110）、1- 乙基 -（3- 二甲基氨基丙基）碳酰
体不仅简单、快速，而且能区分急性感染和既往感染， 二亚胺 （EDC）、NHS（麦克林公司）、荧光检测仪（北
更适合基层医院使用。冠状病毒基因组所编码的抗原中， 京弘进久安生物科技有限公司）、旋转蒸发仪（大龙公
N 蛋白具有较高的免疫原性，可在早期感染时分泌到体 司）、喷金划膜仪（上海金标公司）、斩切机（上海金
液中，作为抗原检测的生物标志物，同时机体产生抗 N 标公司）、玻璃仪器（欣维尔公司）。
蛋白抗体可被用于检测 SARS-CoV-2 感染 ［9］ 。本研究 1.3 实验原理 将 N 蛋白抗体和鼠抗人 IgG 抗体分别
建立了 SARS-CoV-2 抗 N 蛋白 IgG 抗体荧光免疫层析 包被到 NC 膜 C 线、T 线对应区域，将偶联了量子点的
方法，具有检测时间短、方法简便的优点，同时可使用 N 蛋白抗原喷涂到已处理好的玻纤垫上；若待测血清中
免疫荧光检测仪读取硝酸纤维素（NC）膜质控线（C 线）、 含有 N 蛋白抗体，在层析的过程中，与玻纤垫上的量