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利用荧光检测仪测出 FIT/FIC 值即可在一定范围内初步
定量检测。见图 12。
3 讨论
免疫层析技术是一种将抗原抗体特异度反应与色谱
层析技术相结合的新型膜检测分析方法,是目前最常用
的现场快速检测(POCT)检验技术。传统以胶体金为 图 11 稳定性实验检测数据图
标志物的免疫层析检测方法虽然价格低廉、检测简便、 Figure 11 Data graph of stability experiment test
肉眼直观可见,但其灵敏度和特异度方面均差强人意。
表 2 特异度实验测量表
Table 2 Specificity experiment test scale
病毒 C线 T线 FIT/FIC FIT/FIC 均值 结果
229E 59 241 2 694 0.045 47 0.038 92 _
63 145 2 645 0.041 88
48 181 1 417 0.029 40
NL63 91 811 663 0.007 221 0.011 2 _
图 12 标准曲线图
75 561 1 167 0.015 45 Figure 12 Standard curve graph
77 317 845 0.010 92
新型荧光标记材料量子点具有荧光尺寸可调,发射光谱
HKU1 73 395 1 869 0.025 47 0.018 14 _
窄而对称,高量子产率,宽吸收光谱,荧光强度高,耐
70 475 1435 0.020 36
光漂白和稳定性好等优点,在多联检测上是很有前途的
97 929 841 0.008 592 [11]
纳米材料 。本研究表达了 SARS-CoV-2 具有诊断意
OC43 53 188 1 569 0.029 50 0.029 85 _
义的抗原蛋白 -N 蛋白,并利用量子点作为标记材料标
62 453 1 513 0.024 23
记 N 蛋白,应用免疫层析技术原理制备了 SARS-CoV-2
64 301 2 304 0.035 831 5
IgG 抗体检测试纸条,能够在 10 min 左右检测出人血清
MP-P1 22 859 872 0.038 14 0.020 67 _
中 IgG 抗体,与季节性冠状病毒 229E、NL63、HKU1、
20 388 101 0.004 953
OC43 及支原体、呼吸道合胞病毒等其他呼吸道病毒抗
28 102 532 0.018 93
体无交叉反应,重复性良好,预测其稳定性可于常温下
RSV-F0 35 085 662 0.018 86 0.021 03 _
(25 ℃)保存 160 d。本试纸条检测灵敏度为 8.53~17.06
24 447 333 0.013 62 [12]
ng/ml,特异度为 100.00%,灵敏度为 94.29%。SHEN 等
22 412 686 0.030 60
评价了胶体金免疫层析法检测 SARS-CoV-2 抗体的效
MV-NP 25 076 163 0.006 500 0.016 04 _
果,检测 97 例核酸 PCR 法阳性病例,胶体金法检测出
22 791 685 0.030 05
69 例阳性,灵敏度为 71.1%,检测 53 例核酸 PCR 法阴
36 817 426 0.011 57
性病例,胶体金法检测出 2 例阳性,特异度为 96.2%。
RV-E1 43 036 800 0.018 58 0.009 195 _
由此可见,量子点免疫层析法相比胶体金性能更为优良,
31 194 122.5 0.003 927
其原因可能为胶体金法免疫层析通过肉眼观察结果,阳
34 702 176 0.005 071
性结果捕捉率偏低,而量子点等荧光材料通过发射荧光
注:- 表示阴性
可被仪器采集荧光读取结果,结果可靠性更高。另外量
表 3 N 蛋白抗体试纸条、ELISA 试剂盒与核酸检测方法学对比结果 子点更优良的性能决定着其在免疫层析领域的应用必将
Table 3 Comparison results of N protein antibody strip、ELISA kit and 广泛推广。
nucleic acid detection methods
同时,本课题研究具有一定的局限性,体现在样本
检测方法 总体样本数 核酸诊断(例) 数量较少,SARS-CoV-2 阳性血清样本有 35 例,且样
免疫层析试纸条 ELISA 试剂盒 (例) 阳性 阴性
本血清中 IgG 抗体浓度未知,无法代表不同抗体浓度梯
阳性 阳性 32 32 0
度的患者。另外,检测时也可能因为环境因素或样本血
阳性 阴性 1 1 0
阴性 阳性 2 2 0 清内其他干扰因子存在而出现假阳性。利用量子点免疫
阴性 阴性 50 0 50 层析法制备了 SARS-CoV-2 N 蛋白抗体检测试纸条,操