Page 85 - 中国全科医学2022-14

·1746· http://www.chinagp.net E-mail:zgqkyx@chinagp.net.cn

蛋白 IgG 抗体验证试纸条的特异度，此批次试纸条检
0.40 4
测以上 8 种病原 IgG 抗体，其 FIT/FIC 值均小于临界值
0.062，结果均呈阴性，说明试纸条特异度良好。见表 2。
0.30
2.8 方法学比较 利用本实验制备的试纸条与 SARS-
CoV-2 抗体检测 ELISA 试剂盒（北京科卫）同时对血
0.20 7
清样本进行检测比较，同时样本核酸检测结果（临床
确诊）进行三方比较（核酸检测、ELISA 法检测、免
51
0.10 43 疫层析试纸条），结果显示：ELISA 检测法与免疫层
41
析试纸条检测法阳性符合率为 94.12%，阴性符合率为
0 98.04%，总体符合率为 96.47%。本研究建立的免疫层
K_0.04 析法检测试纸条检测 SARS-CoV-2 N 蛋白 IgG 抗体的灵
图 8 阴性样本 FIT/FIC 值箱图 敏度为 94.29%（32/35），特异度为 100.00%（50/50），
Figure 8 Box graph of samples' FIT/FIC values
检测性能良好。见表 3。
20 2.9 稳定性实验 随机抽取同批次 90 条检测试纸条进
行稳定性实验，推测保存时间，结果显示：60.1 ℃下保
存 4 d（160 d，25 ℃）的试纸条检测效能减弱，仅能测
15
出 1∶500 高浓度抗体标准品，且实验数据显示 C 线荧
光值偏低，由此推测本研究试纸条保存时限约为常温环
灵敏度 10 境中 160 d。见图 11。

2.10 测定标准曲线 利用 SARS-CoV-2 N 蛋白 IgG 抗
体标准品作为阳性标准品推导标准曲线，结果显示，以
5
FIT/FIC 均值为纵坐标，样本中抗体浓度为横坐标做坐
2
标图，得出相关曲线 y=0.039 9x+3.052 4（R =0.981），
0
0.00 0.02 0.04 0.06
var001
图 9 排除 5 例离群值样本后阴性样本 FIT/FIC 值正态性检验直方图
Figure 9 Histogram of samples' FIT/FIC values for normality test

择百分位数法计算的上侧界值作为第 95 百分位数，为
0.062，即此试纸条 N 蛋白 IgG 抗体检测 FIT/FIC 临界值
为 0.062 ［10］ 。即经过荧光检测仪测定，最终得出样本
图 10 灵敏度实验测量数据图
FIT/FIC 值≥ 0.062 可判定为阳性，＜ 0.062 为阴性。
Figure 10 Measurement data graph of sensitivity experiment
2.6 试纸条灵敏度与重复性验证 利用 SARS-CoV-2
抗 N 蛋白 IgG 抗体来验证试纸条的灵敏度。结果显示： 表 1 重复性实验测量表
Table 1 Repeatability experiment test scale
1∶500~1∶5 000 的标准品为阳性，1∶10 000 则为阴性。
FIT/FIC
标准品为 85.3 μg/g，稀释 10 000 倍为 8.53 ng/g，稀释 样本浓度 批次 均值 标准偏差 变异系数 结果
5 000 倍为 17.06 ng/g，故该方法的灵敏度为 8.53~17.06 1∶500 第一批次 6.197 0.513 1 0.082 79 +
ng/g 的 SARS-CoV-2N 蛋白 IgG 单克隆抗体，见图 10。 第二批次 7.634 0.737 7 0.096 63 +
另抽取制备的 3 批次试剂卡，检测 1∶500、1∶2 000、 第三批次 5.466 0.489 3 0.089 51 +
1∶5 000 的 N 蛋白 IgG 抗体标准品，每个浓度平行检 1∶2 000 第一批次 2.124 0.117 1 0.055 12 +
测 5 次，进行重复性验证，各浓度标准品均得出阳性结 第二批次 1.578 0.118 9 0.075 30 +
果，且 T、C 线荧光值（FIT/FIC 值）的变异系数（CV） 第三批次 2.343 0.237 1 0.101 2 +
≤ 10%，可见所研制试纸条重复性良好，见表 1。 1∶5 000 第一批次 0.635 0 0.044 82 0.070 58 +
2.7 特异度验证 选取季节性冠状病毒四种分型的 IgG 第二批次 0.451 8 0.039 53 0.087 48 +
抗体（均购自义翘神州公司）及支原体 P1 蛋白、呼吸 第三批次 0.805 1 0.061 11 0.075 91 +
道合胞病毒 F0 蛋白、麻疹病毒 N 蛋白和风疹病毒 E1 注：+ 表示阳性；FIT/FIC=T/C 线荧光比值