背景 慢性萎缩性胃炎(CAG)是胃黏膜"炎-癌"转化的重要病理阶段,Toll样受体4(TLR4)与Sonic Hedgehog(Shh)通路在胃黏膜损伤与修复中起关键作用,NLRP3/Caspase-1通路亦参与胃黏膜上皮细胞的炎症反应和焦亡过程。复方胃炎合剂(CGM)在CAG治疗中效果显著,但其具体作用机制尚不清楚。
目的 观察CGM含药血清通过TLR4与Shh信号通路串话调控NLRP3/Caspase-1通路对胃黏膜上皮细胞焦亡的影响,探讨CGM治疗CAG可能的作用机制。
方法 于2024年1月—2025年3月,将16只Wistar大鼠随机分为空白组和CGM组,每组8只。空白组接受0.9%氯化钠溶液灌胃,CGM组以CGM混悬液连续灌胃10 d后采集血清。采用CCK-8法筛选CGM含药血清,测得最佳干预浓度为10%,最佳干预时间为48 h。采用乙醇诱导人胃黏膜上皮细胞建立CAG细胞模型。将造模成功细胞分为模型组、CGM组、TLR4抑制剂组、TLR4抑制剂+CGM组、TLR4激动剂组、TLR4激动剂+CGM组、Shh抑制剂组、Shh抑制剂+CGM组、Shh激动剂组、Shh激动剂+CGM组。同时将正常GES-1+正常大鼠血清作为空白组。采用RT-qPCR和Western blotting法分别检测细胞TLR4、NF-κB、Shh、NLRP3、Caspase-1 mRNA与蛋白表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液中白介素(IL)-1β、IL-6、IL-18水平。
结果 与空白组比较,模型组细胞TLR4、NF-κB、NLRP3、Caspase-1 mRNA与蛋白表达均升高,Shh mRNA与蛋白表达下降,细胞上清液中IL-1β、IL-6、IL-18水平均升高(P<0.05)。与模型组相比,CGM组、TLR4抑制组与Shh激动组TLR4、NF-κB、NLRP3、Caspase-1 mRNA水平均下降,Shh mRNA水平升高(P<0.05);CGM组NF-κB、NLRP3、Caspase-1蛋白表达均下降(P<0.05);TLR4抑制组TLR4、NF-κB、NLRP3、Caspase-1蛋白表达均下降,Shh蛋白表达上升(P<0.05);TLR4激动剂组TLR4蛋白表达升高(P<0.05);Shh抑制剂组TLR4、NF-κB蛋白表达升高(P<0.05);Shh激动剂组NF-κB、NLRP3、Caspase-1蛋白表达均下降,Shh蛋白表达升高(P<0.05);CGM组细胞上清液中IL-1β、IL-6、IL-18水平均降低(P<0.05);TLR4抑制剂组与Shh激动剂组细胞上清中IL-1β水平均下降(P<0.05),TLR4激动剂组、Shh抑制剂组IL-1β水平升高(P<0.05)。与CGM组相比,TLR4抑制剂+CGM组TLR4、Caspase-1 mRNA水平下降,NF-κB、NLRP3 mRNA与蛋白表达下降,Shh mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);TLR4激动剂+CGM组TLR4、NF-κB mRNA水平升高,Shh mRNA表达下降(P<0.05);Shh抑制剂+CGM组Shh mRNA水平下降(P<0.05);Shh激动剂+CGM组TLR4、NF-κB、Caspase-1 mRNA与蛋白表达下降,Shh mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);TLR4激动剂+CGM组和Shh抑制剂+CGM组血清IL-1β、IL-6与IL-18均升高(P<0.05)。
结论 CGM含药血清可能通过影响TLR4与Shh通路串话调控NLRP3/Caspase-1通路介导胃上皮细胞焦亡过程,改善乙醇诱导GES-1细胞的炎-癌转化进程,从而发挥治疗CAG的作用。