优化溃结方对溃疡性结肠炎气滞血瘀模型大鼠的影响及其作用机制研究

doi:10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0732

中国全科医学 ›› 2024, Vol. 27 ›› Issue (11): 1356-1362.DOI: 10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0732

优化溃结方对溃疡性结肠炎气滞血瘀模型大鼠的影响及其作用机制研究

张帅¹, 李娜²^,^*(), 沈江立², 柳越冬³, 吴宪树³, 王磊⁴, 盛天骄⁵, 徐红俊¹, 安胜军¹^,^*()

1．050091　河北省石家庄市，河北中医药大学
2．712000　陕西省咸阳市中心医院
3．110005　辽宁省沈阳市，辽宁中医药大学附属第三医院
4．021008　内蒙古自治区呼伦贝尔市中蒙医院肛肠科
5．110005　辽宁省沈阳市，解放军北部战区总医院中医科

收稿日期:2023-10-14 修回日期:2023-11-24 出版日期:2024-04-15 发布日期:2024-01-23
通讯作者: 李娜, 安胜军
作者贡献：张帅、李娜提出研究目标，负责研究的构思与设计，数据收集与论文撰写；沈江立、柳越冬、吴宪树、王磊、盛天骄负责数据录入及统计分析；徐红俊负责文章的审校；张帅、李娜、安胜军负责文章的质量控制与审校，对文章整体负责。
基金资助:
陕西省自然科学基础研究计划项目(2022JM-489); 陕西省中医药管理局秦创原中药创新研发项目(2022-QCYZH-015); 2023年度河北省社会科学发展研究课题(20230204037)

Effect and Mechanism of Optimized Kuijie Decoction in Ulcerative Colitis Rats with TCM Syndrome Differentiation of Qi Stagnation and Blood Stasis

ZHANG Shuai¹, LI Na²^,^*(), SHEN Jiangli², LIU Yuedong³, WU Xianshu³, WANG Lei⁴, SHENG Tianjiao⁵, XU Hongjun¹, AN Shengjun¹^,^*()

1. Hebei University of Chinese Medicine, Shijiazhuang 050091, China
2. Xianyang Central Hospital, Xianyang 712000, China
3. The Third Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110005, China
4. Anorectal Department, China-Mongolia Hospital, Hulunbuir 021008, China
5. Department of Traditional Chinese Medicine, PLA Northern Theater Command General Hospital, Shenyang 110005, China

Received:2023-10-14 Revised:2023-11-24 Published:2024-04-15 Online:2024-01-23
Contact: LI Na, AN Shengjun

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摘要/Abstract

摘要： 背景经验方优化溃结方能有效提高溃疡性结肠炎（UC）患者生活质量，促进肠黏膜愈合和临床缓解，但其作用机制尚不完全明确。目的探讨优化溃结方对UC气滞血瘀模型大鼠的影响及其作用机制。方法 2023年9—10月，选取SPF级雄性SD大鼠70只并采用随机数字表法将其随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、低剂量组、标准剂量组、益气组、活血组，每组10只。采用三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇二次致炎法结合束缚法建立UC气滞血瘀模型。正常组大鼠在造模时使用0.9%氯化钠溶液灌肠，并与其他组大鼠进行同步抓取、固定，在造模成功后给予等体积水灌胃，1次/d，共灌胃14次；模型组大鼠在造模成功后给予等体积水灌胃，1次/d，共灌胃14次；柳氮磺胺吡啶组、低剂量组、标准剂量组、益气组、活血组大鼠分别在造模成功后给予柳氮磺胺吡啶药液0.54 g/kg灌胃、低剂量优化溃结方药液0.837 g/kg、标准剂量优化溃结方药液1.674 g/kg灌胃、黄芪药液1.8 g/kg、红花药液0.9 g/kg，均为1次/d，均灌胃14次。采用高精度透射电镜观察7组大鼠干预后结肠组织超微结构变化，并比较7组大鼠干预后结肠组织趋化因子受体4（CXCR4）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、转化生长因子激酶1（TAK1）表达水平。结果低剂量组、标准剂量组大鼠干预后结肠组织超微结构趋于正常。模型组大鼠干预后结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1蛋白灰度比值、mRNA相对表达量高于正常；柳氮磺胺吡啶组、低剂量组、标准剂量组、益气组、活血组大鼠干预后结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1蛋白灰度比值、mRNA相对表达量低于模型组（P<0.05）；标准剂量组大鼠干预后结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1蛋白灰度比值低于柳氮磺胺吡啶组，活血组大鼠干预后结肠组织VEGFA、TAK1 mRNA相对表达量低于柳氮磺胺吡啶组（P<0.05）。结论优化溃结方及其益气、活血组分可有效降低UC气滞血瘀模型大鼠结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1表达水平，其治疗作用可能是益气组分、活血组分通过协同调节结肠组织中CXCR4、VEGFA、TAK1表达水平而实现。

关键词: 结肠炎，溃疡性, 血瘀气滞, 大鼠, 优化溃结方, 药理作用分子作用机制（中药）

Abstract:

Background

Experiential effective prescription optimized Kuijie decoction can effectively improve the quality of life of patients with ulcerative colitis (UC), promote the intestinal mucosal healing and clinical remission, but its mechanism remains unclear now.

Objective

To investigate the effect and mechanism of optimized Kuijie decoction in UC rats with TCM syndrome differentiation of Qi stagnation and blood stasis.

Methods

From September to October 2023, 70 SPF-grade male SD rats were randomly divided into the blank-control, model, salicylazosulfapyridine, low-dose, standard-dose, Qi-enhancing and Blood-activating groups, with 10 rats in each group. UC model with TCM syndrome differentiation of Qi stagnation and blood stasis was established by trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS) /ethanol secondary inflammation combined with restraint method. Rats in the blank-control group were enucleated with 0.9% sodium chloride solution at the time of modeling and were grasped and fixed synchronously with the rats in the other groups, and were given an equal volume of water by gavage once per day after the establishing for 14 days; rats in the model group were given an equal volume of water by gavage once per day after the establishing for 14 days; rats in the salicylazosulfapyridine, low-dose, standard-dose, Qi-enhancing and Blood-activating groups were given intragastric administration with salicylazosulfapyridine suspension (0.54 g/kg), low-dose optimized Kuijie decoction (0.837 g/kg), standard-dose optimized Kuijie decoction (1.674 g/kg), Astragalus suspension (1.8 g/kg) and Safflower suspension (0.9 g/kg) once per day after the establishing for 14 days, respectively. High-precision transmission electron microscope was used to observe the ultrastructural changes in the colonic tissues of the seven groups of rats after intervention, the expression levels of CXCR4, VEGFA, and TAK1 were compared among the seven groups of rats after intervention.

Results

The ultrastructure of colonic tissue of rats in the low-dose and standard-dose groups tended to be normal after intervention. The gray ratios of proteins and relative mRNA expression quality of CXCR4, VEGFA and TAK1 in colonic tissues of rats in the model group were higher than the blank-control after intervention (P<0.05) ; the gray ratios of proteins and relative mRNA expression quality of CXCR4, VEGFA and TAK1 in the salicylazosulfapyridine, low-dose, standard-dose, Qi-enhancing and Blood-activating groups were significantly lower than those in the model group (P<0.05) ; the gray ratios of proteins of CXCR4, VEGFA and TAK1 in the standard-dose group were significantly lower than those in the salicylazosulfapyridine group, relative mRNA expression quality of VEGFA and TAK1 in the Blood-activating group was significantly lower than that in the salicylazosulfapyridine group, respectively (P<0.05) .

Conclusion

Optimized Kuijie decoction and its Qi-enhancing and Blood-activating components can effectively reduce the expression of CXCR4, VEGFA and TAK1 in colonic tissue in UC rats with TCM syndrome differentiation of Qi stagnation and blood stasis, its therapeutic effect may act through the coordinate regulating of the expression of CXCR4, VEGFA and TAK1 in colonic tissue by Qi-enhancing component and blood-activating component.

Key words: Colitis, ulcerative, Syndrome of blood stasis and Qi stagnation, Rats, Optimized Kuijie decoction, Molecular mechanisms of pharmacological action (TCD)

张帅,李娜,沈江立,等. 优化溃结方对溃疡性结肠炎气滞血瘀模型大鼠的影响及其作用机制研究[J]. 中国全科医学, 2024, 27(11): 1356-1362. DOI: 10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0732.
ZHANG Shuai,LI Na,SHEN Jiangli, et al. Effect and Mechanism of Optimized Kuijie Decoction in Ulcerative Colitis Rats with TCM Syndrome Differentiation of Qi Stagnation and Blood Stasis[J]. Chinese General Practice, 2024, 27(11): 1356-1362. DOI: 10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0732.

图/表 5

表1 CXCR4、VEGFA、TAK1 PCR引物序列

Table 1 PCR primer sequences of CXCR4，VEGFA and TAK1

引物名称	引物序列（5'~3'）	片段长度（bp）	退火温度（℃）
R-GAPDH-S	CTGGAGAAACCTGCCAAGTATG	138	60
R-GAPDH-A	GGTGGAAGAATGGGAGTTGCT		60
R-CXCR4-S	GTGGGCAATGGGTTGGTAAT	262	60
R-CXCR4-A	CGTGGACAATGGCAAGGTAG		60
R-VEGFA-S	GCAATGATGAAGCCCTGGAGT	157	60
R-VEGFA-A	GGCTTTGTTCTATCTTTCTTTGGTC		60
R-TAK1-S	TATGCTGAAGGAGGCTCGTTGT	162	60
R-TAK1-A	AGGCTTGAGGTCCCTATGAATG		60

图1 7组大鼠造模后第15天结肠组织超微结构变化（投射电镜，×5 000）注：TJ=细胞间紧密连接，ZA=细胞间中间连接，Mv=微绒毛，M=线粒体，ASS=自噬溶酶体，Go=高尔基体，LD=脂滴，N=细胞核，De=桥粒，RER=粗面内质网；A代表正常组，B代表模型组，C代表柳氮磺胺吡啶组，D代表低剂量组，E代表标准剂量组，F代表益气组，G代表活血组。

Figure 1 Change of ultra microstructure in colonic tissue in the seven groups after 15 days of the establishing

图2 7组大鼠干预后结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1蛋白电泳图注：A~G依次代表正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、低剂量组、标准剂量组、益气组、活血组；CXCR4=趋化因子受体4，VEGFA=血管内皮生长因子A，TAK1=转化生长因子激酶1，GAPDH=三磷酸甘油醛脱氢酶。

Figure 2 Electrophoretogram of CXCR4，VEGFA and TAK1 in colonic tissue in the seven groups after intervention

表2 7组大鼠干预后结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1蛋白灰度比值（±s）

Table 2 Comparison of gray ratios of proteins of CXCR4，VEGFA and TAK1 in colonic tissue in the seven groups after intervention

组别	只数	CXCR4	VEGFA	TAK1
正常组	10	1.27±0.03	0.87±0.17	0.98±0.29
模型组	10	1.90±0.06^a	1.46±0.27^a	1.94±0.52^a
柳氮磺胺吡啶组	10	1.51±0.18^ab	0.98±0.27^b	1.58±0.48^ab
低剂量组	10	0.36±0.14^abc	0.10±0.09^abc	1.03±0.26^bc
标准剂量组	10	0.10±0.09^abc	0.05±0.06^abc	0.74±0.18^abc
益气组	10	1.09±0.08^abc	0.40±0.25^abc	1.45±0.10^ab
活血组	10	1.50±0.15^ab	1.10±0.20^ab	1.50±0.09^ab
F值		989.373	203.942	53.058
P值		<0.001	<0.001	0.001

表3 7组大鼠干预后结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1 mRNA相对表达量比较（±s）

Table 3 Comparison of relative mRNA expression quality of CXCR4，VEGFA and TAK1 in colonic tissue in the seven groups after intervention

组别	只数	CXCR4	VEGFA	TAK1
正常组	10	21.13±0.12	25.75±0.49	22.31±0.43
模型组	10	33.88±1.19^a	37.40±0.79^a	33.43±0.81^a
柳氮磺胺吡啶组	10	21.34±0.26^b	27.48±0.28^ab	23.14±0.76^ab
低剂量组	10	21.21±1.11^b	25.94±0.63^bc	23.06±0.67^ab
标准剂量组	10	21.76±1.10^b	27.79±0.63^ab	22.49±0.21^bc
益气组	10	21.80±1.22^b	27.02±0.80^ab	23.89±0.97^ab
活血组	10	18.90±3.09^b	25.93±0.55^bc	21.84±0.70^bc
F值		115.073	453.648	347.877
P值		<0.001	<0.001	<0.001

参考文献 23

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