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抗体(武汉赛维尔生物科技有限公司,GB23303); (LVPWs)、左心室收缩末期前壁厚度(LVAWs),
masson 染色试剂盒(武汉赛维尔生物科技有限公司, 分别测 3 个心动周期取平均值(整个过程监测大鼠核心
货号:G1006);组化试剂盒 DAB 显色剂(武汉赛维尔 温度和心电图情况)。
生物科技有限公司,货号:G1211);肿瘤坏死因子 α 1.2.5 大鼠心脏标本制备 首次运动训练开始前与末次
(TNF-α)试剂盒〔ThermoFisher Scientific(美国), 运动训练结束后 24~48 h 对各组大鼠分别称重,记录体
货号:88-7324〕。 BW,首次运动前为初始 BW,末次运动后为最终 BW。
1.2 实验方法 超声数据采集完成后,摘取心脏,用预冷 0.9% 氯化钠
1.2.1 AMI 大鼠模型制备 结扎大鼠 LAD 造模,术前腹 溶液反复冲洗多余血液并置于纱布或吸水纸上控水,称
腔注射 10%水合氯醛麻醉(350 mg/kg),进行心电监护 重心脏质量(heart weight,HW)。计算心脏质量指数
后经颈行气管插管,使用小动物呼吸机辅助呼吸〔参数: (HMI),HMI=HW/BW(使用最终 BW 值进行计算),
呼吸频率 70 次 /min,吸∶呼 =1 ∶ 1,潮气量 7.5 ml 并对 HMI 进行标准化处理:标准化 HMI=HMI/Sham 组
(1~5 ml/100 g)〕。完成气管插管后开胸暴露心脏, 训练 4 周后 HMI 均值。每组大鼠取部分左心室组织于 4%
于左心耳下方 2~4 mm 结扎 LAD,观察结扎远端心肌颜 多聚甲醛,常规石蜡包埋固定,用于 HE、Masson 染色、
色变浅,心电图 ST 段抬高持续 0.5 h,暂定为 AMI 造模 免疫组化分析,剩余大鼠心脏 -80 ℃冰箱保存待用。
成功,缝合关胸、关颈,术后 1 周用超声检查,再次判 1.2.6 HE 染色 石蜡脱水切片后固定在载玻片上,光
断造模是否成功,排除失败大鼠。 学显微镜在 200× 倍镜下使用 HE 染色鉴定切片,然
此外,另有部分大鼠术中插管、开胸处理,不对 后在不同倍数下观察组织切片情况,用分析软件 Media
LAD 进行结扎,之后缝合关胸、关颈,并在 1 周后进行 Cybemetics,Image-Pro Plus 6.0 分析切片中的基本病理
超声检查。 变化。
1.2.2 实验大鼠分组 术后存活的大鼠适应性喂养 1 1.2.7 Masson 染色 石蜡切片脱蜡后用水冲洗,使用
周,术中未进行结扎的大鼠随机选取 14 只纳入假手术 Masson 三色法染色试剂盒按照说明对标本进行染色后,
组(Sham 组);AMI 模型鼠随机分为心梗静息组(MI-SED 切片脱水澄清,封片固定,拍照后使用分析软件 Media
组,n=14)、心梗高强度间歇训练(HIIT)组(MI-HIIT Cybemetics、Image Pro Plus 6.0 对图像进行分析,以蓝
组,n=14)和心梗中等强度持续训练组(MI-MICT 组, 色胶原纤维占比代表梗死面积〔胶原纤维面积占比(%)
n=14)。 = 胶原像素面积 / 视野像素面积 ×100%〕。
1.2.3 运动训练方案 Sham 组与 MI-SED 组不进行运 1.2.8 免疫组化分析 石蜡切片防脱片处理后,用二甲
动训练。MI-HIIT 组和 MI-MICT 组大鼠术后 1 周开始在 苯与梯度乙醇处理后,进行抗原修复,消除内源性过
小动物跑步机上进行适应性跑步训练:速度 15 m/min, 氧化物酶活性后封闭,之后与兔抗 CD31 多克隆抗体孵
合计 30 min/d,持续 5 d。2 d 后开始正式训练,正式训 育,清洗后再与山羊抗兔 IgG 抗体孵育,显色复染后,
练前先进行热身(速度 5 m/min,持续 3 min)。正式训 阳性显示棕黄色。最后使用显微镜于 400× 倍镜下每张
练 MI-HIIT 组:高强度运动训练〔速度 25 m/min,持 片随机选取 5~7 个目的区域成像,使用分析软件 Media
续时间 4 min/ 次,80%~90% 最大摄氧量(VO 2 max), Cybemetics、Image-Pro Plus 6.0 对图像进行分析,计算
坡度为 0°〕与中等强度运动训练(速度 15 m/min,持 视野面积(S)并计数其微血管数量(MVD),血管新
2
续时间 3 min/ 次,50%~60%VO 2 max,坡度为 0°)交 生以 MVD/S 表示(个 /m )。
替进行,每天各 7 次,每周训练 5 d。MI-MICT 组:速 1.2.9 TNF-α 水平检测 于第 4 周、第 8 周末次训练
度 17 m/min, 持 续 60 min/ 次,1 次 /d,(50%~70%) 结束后,取大鼠全血标本于室温放置 2 h 内离心(4 ℃,
VO 2 max,坡度为 0°,每周训练 5 d [9] ;大鼠训练 4 周 3 000 r/min,15 min,离心半径 8.5 cm),取上清液按
后每组随机取 7 只大鼠进行数据和标本采集,第 8 周结 照 TNF-α 试剂盒步骤进行检测,根据标准品浓度和
束时对其余 7 只大鼠进行数据和标本采集。 OD 值做标准曲线再计算样本浓度。
1.2.4 心脏彩色多普勒超声检查 运动训练前 1 d 与 1.3 统 计 学 处 理 数 据 采 用 SPSS 25.0、GraphPAD
运动训练结束后次日进行超声数据采集,方法如下: Prism9 统计软件进行统计分析,符合正态分布的计量资
4% 七氟烷(流速 0.5~1.0 L/min)与 97% 氧气麻醉大鼠 料以( ±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,
后,将其固定在超声采集板上,大鼠鼻罩吸氧维持麻醉 组间两两比较采用 LSD-t 检验。以 P<0.05 为差异有统
(1%~2% 七氟烷与 97%~99% 氧气),完成胸腹部脱毛, 计学意义。
用 30 MHz 探头采集长轴 M 模块的射血分数(EF)、缩 2 结果
短分数(FS)、左心室收缩末期内径(LVDs)、左心 2.1 四组大鼠训练 4 周和 8 周 BW、HW 与标准化 HMI
室舒张末期内径(LVDd)、左心室收缩末期后壁厚度 比较 四组大鼠初始 BW 比较,差异无统计学意义