摘要： 目的  验证黄酒多酚（YWPC）是否具有抑制同型半胱氨酸（Hcy）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的作用以及其产生作用的信号通路。方法  采用组织贴块法培育SD大鼠胸主动脉VSMCs，取第4～7代细胞用于实验。细胞分为5组，分别为对照组，Hcy组（500 μmol/L Hcy），YWPC 1 mg/L组（500 μmol/L Hcy+1 mg/L YWPC），YWPC 10 mg/L组（500 μmol/L Hcy+10 mg/L YWPC），YWPC 100 mg/L组（500 μmol/L Hcy+100 mg/L YWPC）。采用MTT法检测VSMCs增殖情况；细胞划痕实验和Transwell法检测VSMCs迁移和侵袭情况；Western blotting法检测p-AKT/AKT表达情况。为验证YWPC是否经Pi3K/AKT通路发挥抑制VSMCs的增殖和迁移，分别加入LY-294002和胰岛素生长因子1（IGF-1）用来抑制和激活Pi3K/AKT通路，细胞被分为Hcy组，YWPC组，LY-294002＋Hcy组，LY-294002＋YWPC组；Hcy组，YWPC组，IGF-1＋Hcy组，IGF-1＋YWPC组，再分别采用上述方法检测VSMCs增殖、迁移和侵袭情况。结果  培养大鼠胸主动脉VSMCs，2周左右细胞融合可以传代，经SM-actin细胞免疫荧光鉴定及DAPI核染，确定细胞纯度在99%以上。24、48 h时，5组OD值比较，差异有统计学意义（F=52.575，P=0.016；F=83.756，P=0.014）；其中Hcy组OD值高于对照组和YWPC组，且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。24、48、72、96 h时，5组VSMCs迁移面积比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；其中Hcy组VSMCs迁移面积多于对照组（P＜0.05）；YWPC组VSMCs迁移面积低于Hcy组，且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。48 h时，5组迁移细胞数比较，差异有统计学意义（F=79.354，P=0.001）；其中Hcy组穿透Transwell膜细胞数高于对照组（P＜0.05）；YWPC组穿透Transwell膜细胞数低于Hcy组，且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。5组p-AKT/AKT比较，差异有统计学意义（F=56.723，P=0.002）；其中Hcy组p-AKT/AKT高于对照组（P＜0.05）；YWPC组p-AKT/AKT低于Hcy组，且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。加入LY-294002:24 h时，各组OD值、VSMCs迁移面积比较，差异有统计学意义（F=46.875，P=0.004；F=67.723，P=0.002）；其中LY-294002+Hcy组OD值、VSMCs迁移面积低于Hcy组（P＜0.05）；LY-294002+Hcy组与LY-294002+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。48 h时，各组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较，差异有统计学意义（F=52.904，P=0.003；F=87.904，P=0.001）；其中LY-294002+Hcy组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT低于Hcy组（P＜0.05）；LY-294002+Hcy组与LY-294002+YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。加入IGF-1:24 h时，各组OD值、VSMCs迁移面积比较，差异有统计学意义（F=48.052，P=0.007；F=63.085，P=0.002）；其中IGF-1+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积高于YWPC组（P＜0.05）；IGF-1+Hcy组与IGF-1+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。48 h时，各组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较，差异有统计学意义（F=55.941，P=0.008；F=65.011，P=0.005）；其中IGF-1＋YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT高于YWPC组（P＜0.05）；IGF-1+Hcy组与IGF-1+YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论  YWPC通过抑制Pi3K/AKT信号通路抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移。

关键词: 多酚类, 肌, 平滑, 血管, Pi3K/AKT