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损伤刺激反应、单纯疱疹病毒 1 型感染、RNA 代谢、
调节细胞对压力的反应、适应性免疫系统等，TRRUST
数据库预测 MHC Ⅱ反式激活蛋白（CIITA）转录因子可
能参与了 EAT 间 DEGs 的调控，见图 6、7。
2.2 EAT 组织的 WGCNA 分析
2.2.1 EAT 组织 WGCNA 软阈值的选择与模块的初步划
分 本研究最终以β=5作为软阈值来构建共表达网络，
设置每个基因模块中基因数目最小为 30，设定基因的
聚类高度上限为 0.995。最终得到 156 个网络模块，模
块中的基因个数为 30~2 169。根据拓扑重叠程度，制作
模块相关性图，见图 8、9。
2.2.2 临床信息关联与 hub 基因的获取 将各个划分
出的模块与临床信息进行关联分析，得到与 AS 患者的
EAT 样本临床信息最为相关的模块进行后续研究。结
果 发 现，AS 患 者 EAT 与 green4（r=0.50，P=0.02）、
-3
slateblue（r=0.54，P=8.0×10 ）、darkseagreen4（r=0.55，
-3
-3
P=6.4×10 ）、darkolivegreen1（r=0.55，P=7.0×10 ）、
-3
sienna4（r=0.56，P=5.6×10 ）、brown3（r=0.57，
图 6 EAT 间 DEGs 的 Metascape 富集分析
Figure 6 Metascape enrichment analysis of differentially expressed genes in epicardial adipose tissue
图 7 EAT 间 DEGs 的 TRRUST 数据库预测转录因子
Figure 7 TRRUST database-based analysis of differentially expressed
genes in epicardial adipose tissue to predict transcription factors 组相比，CAD 患者的 5 个所选基因的表达水平差异有
March 2023, Vol.26 No.8
-3
P=4.2×10 ） 模 块 呈 正 相 关， 与 deeppink（r=0.50，
-3
P=0.01）、lavender（r=0.60，P=2.6×10 ）、
-3
lavenderblush3（r=0.56，P=5.9×10 ）呈负相关，以
|MM|>0.8 筛选所选模块内 hub 基因，见图 10。
2.3 关键基因的获得 将 DEGs 同模块内 hub 基因
取交集，获得差异表达的模块内 hub 基因，将其作为
EAT 组织参与 AS 病理生理过程的关键基因，其中上调
hub 基 因 为 DDX47、FEM1C、NOL11、SRP54、ABI1、
PATL1、BNIP2，下调 hub 基因为 C1orf159、CHCHD4，
见图 11。
2.4 免疫细胞浸润分析 通过 Cibersort 反卷积算
法， 计 算 GSE64554 芯 片 中 CAD 组 和 健 康 对 照 组
EAT 的免疫细胞浸润情况。研究发现，CAD 组 EAT
+
组织较健康对照组中初始 CD 4 T 细胞表达丰度升高
（P=0.048），静息树突细胞表达丰度减低（P=0.044），
见图 12、13。
2.5 CAD 组与健康对照组 EXO 间 DEGs 采用“limma”
包选获取 CAD 组与健康对照组 EXO 间 DEGs，以
P<0.05，|logFoldchange|>1 作为筛选差异基因的阈值，
共得到 DEGs 1 658 个，其中上调 278 个，下调 1 380 个，
见图 14、15。
2.6 EAT 来源 EXO 将 CAD 组与健康对照组 EAT、
EXO 间 DEGs 取 交 集 并 做 Venn 图， 共 获 得 129 个 基
因，其中上调 16 个，下调 113 个，经筛选，将 BPI、
BIRC5、CXCL12、RNASE1、F2R 作为关键基因并通过
qRT-PCR 进行验证，见图 16。
2.7 EAT 来源 EXO 间 DEGs 的验证 收集 CAD 组和
健康对照组外周血，运用 qRT-PCR 验证生物信息学分
析所得的 EAT 来源 EXO 基因 BPI、BIRC5、CXCL12、
RNASE1、F2R 的 mRNA 水平。结果显示，与健康对照