中国全科医学 ›› 2015, Vol. 18 ›› Issue (24): 2934-2938,2945.DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2015.24.013
刘小军，杨琳，潘玉夏，王兴哲，尚银涛，王茜，杨敬慈，罗建民
摘要： 目的 通过小干扰RNA（siRNA）沉默K562细胞bcr/abl基因使SH2肌醇磷脂酶（SHIP）基因表达增加，探讨SHIP基因缺失对K562细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 构建bcr/abl基因的化学合成siRNA，并转染到K562细胞，分为转染特异性siRNA实验组、转染非特异性siRNA对照组、空白对照组。Western blotting法检测转染后K562细胞p210表达量,实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）检测各组细胞中SHIP mRNA表达量；Western blotting法检测SHIP、磷酸化蛋白激酶B 308（p-Akt308）和磷酸化蛋白激酶B 473（p-Akt473）的表达量；MTT比色法检测K562细胞增殖率；流式细胞仪检测K562细胞凋亡率；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测核因子（NF）-κB活性。结果 转染特异性siRNA实验组K562细胞p210表达量、p-Akt308表达量、p-Akt473表达量较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低，SHIP mRNA表达量、SHIP表达量、细胞凋亡率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组升高（P＜0.05）；空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞p210表达量、SHIP mRNA表达量、SHIP表达量、p-Akt308表达量、p-Akt473表达量、细胞凋亡率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。第1天、第3天、第5天转染特异性siRNA实验组K562细胞增殖率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低（P＜0.05）；空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞增殖率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。第3天、第5天转染特异性siRNA实验组NF-κB活性较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低（P＜0.05）；空白对照组与转染非特异性siRNA对照组NF-κB活性比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 SHIP基因表达受bcr/abl基因的调控，SHIP表达缺失可能是K562细胞过度增殖和凋亡减少的重要因素。
