摘要： 目的  建立体外稳定过表达酸敏感离子通道1a（ASIC1a）的Fisher大鼠甲状腺上皮细胞（FRT细胞），采用Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测〔乳酸脱氢酶（LDH）释放法〕测定ASIC1a活性，探讨高通量筛选ASIC1a抑制剂的可行性。方法  2014年1月-2016年2月，利用分子生物学方法，构建ASIC1a过表达载体pcDNA3.1/myc-His-mASIC1a，通过细胞转染技术建立了稳定过表达ASIC1a的Fisher大鼠FRT细胞。将细胞分成两组，对照组（FRT细胞）和实验组（稳定过表达ASIC1a的FRT细胞），并分别未负载和负载Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM，采用酶标检测仪测定双波长（340 nm和380 nm）的值，计算F340/F380。对照组和实验组细胞经不同pH值酸液（pH值7.5、7.0、6.5、6.0、5.5）刺激后，采用酶标检测仪测定450 nm波长处LDH释放量。结果  对照组与实验组未负载Fura-2/AM细胞F340/F380比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较对照组升高（P＜0.05）；对照组和实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较未负载Fura-2/AM细胞升高（P＜0.05）。pH值6.5、6.0、5.5时，实验组细胞LDH释放量大于对照组（P＜0.05）；对照组和实验组细胞不同pH值时LDH释放量比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论  本研究成功建立稳定过表达ASIC1a的FRT细胞，Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测（LDH释放法）两种方法测定ASIC1a活性，使高通量筛选ASIC1a抑制剂成为可能，为发现高选择性和高活性的天然小分子ASIC1a抑制剂奠定了基础。

关键词: 高通量筛选分析, 酸敏感离子通道1a, 上皮细胞, 乳酸脱氢酶