中国全科医学 ›› 2015, Vol. 18 ›› Issue (35): 4325-4329.DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2015.35.013
李里，宫亮，吴玉斌
摘要： 目的 探讨PAX2稳转细胞系构建及生物学作用。方法 选择处于对数生长期大鼠肾小管上皮细胞，实验分为稳转组、空载组、对照组。稳转组采用阳离子脂质体转导将pEGFP-PAX2转入大鼠肾小管上皮细胞，空载组采用同样方法配置空载质粒转染溶液，对照组不添加质粒转染溶液。经G418筛选，建立稳定转染细胞系。通过细胞划痕实验及Transwell实验检测PAX2稳转细胞系的细胞迁移率及细胞侵袭作用。结果 应用G418筛选14 d，稳转组大鼠肾小管上皮细胞有明显克隆长出，建立PAX2基因稳定转染肾小管上皮细胞系。稳转组在荧光显微镜下可见绿色荧光，基因融合表达获得成功。稳转组细胞PAX2条带密度与β-action吸光度比值为（1.00±0.04），空载组为（0.83±0.03），对照组为（0.85±0.04），3组吸光度比值比较，差异有统计学意义（F=398.7，P＜0.05）；其中稳转组吸光度比值高于空载组和对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。细胞划痕后18 h，对照组、空载组和稳转组细胞迁移率分别为（39.34±5.34）%、（40.56±7.54）%和（83.72±7.12）%，3组细胞迁移率比较，差异有统计学意义（F=431.8，P＜0.05）；其中稳转组细胞迁移率高于对照组和空载组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。各组细胞培养48 h后，对照组、空载组和稳转组迁移细胞分别为（23.33±3.63）、（22.00±8.14）、（45.67±7.14），3组迁移细胞数比较，差异有统计学意义（F=248.5，P＜0.05）；其中稳转组迁移细胞数高于对照组和空载组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 pEGFP-PAX2质粒成功转染大鼠肾小管上皮细胞，并成功筛选出高效稳定表达PAX2的稳转细胞系。PAX2稳转增加了肾小管上皮细胞的迁移及侵袭能力。
