摘要： 背景  乙型肝炎病毒X蛋白（HBX）在乙型肝炎病毒复制及肝癌形成中扮演着重要的角色。研究HBX相关微小RNA（miRNAs）的差异表达有可能为调控乙型肝炎病毒复制、阐明肝癌发展进程及开展预后干预提供重要信息。目的  探讨肝癌细胞中HBX相关miRNAs的差异表达及其在乙型肝炎病毒复制中的作用。方法  选取2014年1-10月第二军医大学附属东方肝胆外科医院收治的13例肝癌患者的肝癌组织及距离肝癌组织>2 cm癌旁组织的新鲜石蜡包埋标本，采用微阵列技术分析HBX相关miRNAs的差异表达，实时荧光定量反转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）法定量分析肝癌组织与癌旁组织中7个与肝脏功能相关的miRNAs及HBX mRNA表达水平，同时分析过表达hsa-miR-373或抑制hsa-miR-22对乙型肝炎病毒复制的影响。结果  微阵列技术分析显示，HepG2-X细胞系和HepG2-CAT细胞系中有46种miRNAs差异表达，与HepG2-CAT细胞系相比，HepG2-X细胞系中20种miRNAs表达上调，26种miRNAs表达下调。肝癌组织与癌旁组织中hsa-miR-22、hsa-miR-373、hsa-miR-92、hsa-miR-155及HBX mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；肝癌组织与癌旁组织中hsa-miR-181a、hsa-miR-34a、hsa-let-7i表达水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。Pearson相关性分析结果显示，hsa-miR-22表达水平与HBX mRNA表达水平呈正相关（r=0.415，P=0.018），hsa-miR-373、hsa-miR-92、hsa-miR-155表达水平与HBX mRNA表达水平呈负相关（r=-0.322，P=0.043；r=-0.369，P=0.028；r=-0.426，P=0.016）；hsa-miR-181a、hsa-miR-34a、hsa-let-7i表达水平与HBX mRNA表达水平无直线相关关系（r=0.076，P=0.363；r=0.017，P=0.676；r=0.122，P=0.242）。第2天和第3天hsa-miR-22抑制剂组、hsa-miR-373前体组HepG2.2.15细胞系及HepAD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较阴性对照组降低（P＜0.05）；第2天和第3天hsa-miR-373前体组HepG2.2.15细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较hsa-miR-22抑制剂组降低（P＜0.05）。第2天hsa-miR-373前体组HepAD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较hsa-miR-22抑制剂组升高，第3天hsa-miR-373前体组HepAD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较hsa-miR-22抑制剂组降低（P＜0.05）。第2天和第3天hsa-miR-373前体组HepG 2.2.15细胞系乙型肝炎病毒拷贝抑制率较hsa-miR-22抑制剂组升高（P＜0.05）。第2天hsa-miR-373前体组HepAD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝抑制率较hsa-miR-22抑制剂组降低，第3天hsa-miR-373前体组HepAD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝抑制率较hsa-miR-22抑制剂组升高（P＜0.05）。结论  HBX相关miRNAs的差异表达可通过靶向相关信号转导通路影响乙型肝炎病毒在肝癌细胞内的复制。

关键词: 肝肿瘤, 乙型肝炎病毒X蛋白, 微小RNA, 病毒复制